师:同学们,今天我们来复习人教版必修2第三章基因的本质。首先学习第三节DNA的复制,DNA是如何进行复制的呢?下面我们跟随科学家的脚步重温DNA复制的方式。沃森和克里克在发表DNA双螺旋结构的短文里提到,碱基特异性配对方式暗示着遗传物质复制的一种可能机制。请大家思考两个问题:一、碱基互补配对原则暗示DNA的复制机制可能是怎样的?
生:暗示DNA的复制可能要先解开DNA双螺旋的两条链,然后通过碱基互补配对合成互补链。
师:问题二,这句话中为什么要用“可能”二字?这反映科学研究具有什么特点?
生:说明科学研究需要大胆想象,但得出结论必须建立在确凿证据之上。
师:沃森和克里克提出了遗传物质自我复制的假说:一、DNA复制时,DNA双螺旋解开,互补碱基间氢键断裂;二、解开的两条DNA单链分别作复制模板,游离的脱氧核糖核苷酸依据碱基互补配对原则,通过形成氢键结合到模板单链上;三、新合成的每个DNA分子都保留原来DNA分子中的一条链,这种复制方式叫半保留复制,特点是形成的分子一半新一半旧。提出这一假说后,也有人提出不同观点,即全保留复制和分散复制。全保留复制是以两条母链为模板合成两条DNA子链,子代DNA中母链重新结合,两条子链彼此结合成另一个子代DNA分子,特点是一半全新一半全旧。分散复制是亲代DNA双链被切成片段后合成子链,然后子母双链聚集成链,特点是新旧随机结合。到底哪种假说是正确的呢?第一,提出问题:DNA以什么方式进行复制?第二,提出假说:第一种可能是半保留复制,子代DNA保留亲代DNA中的一条链;第二种可能是全保留复制,子代DNA双链都是新合成的;第三种可能是分散复制,亲代DNA双链被切成片段后合成子链,然后子母双链聚集成链。问题一,要通过实验探究DNA复制是哪种方式,关键思路是什么?
生:关键思路是通过实验区分亲代和子代的DNA。
师:问题二,DNA肉眼看不见,如何区分亲代和子代的DNA?又如何实验观察区分呢?1958年,美国生物学家梅塞尔森和斯塔尔以大肠杆菌为实验材料,运用同位素标记法设计了一个巧妙实验,大肠杆菌20分钟繁殖一次,繁殖速度较快。问题三,如果用同位素标记,标记什么元素好?怎样形成不同密度的DNA分子并加以区分呢?
生:氮15和氮14是氮元素的两种稳定同位素,这两种同位素相对原子质量不同,含氮15的DNA比含氮14的DNA密度大。可以将生长在含氮15培养基中的大肠杆菌和生长在含氮14培养基中的大肠杆菌进行离心,重的氮15的DNA条带密度高,接近离心管底部;轻的氮14的DNA条带密度小,接近离心管上部。
师:差速离心法和密度梯度离心法有什么区别?
生:差速离心法主要是逐渐提高离心速率,依次分离出不同大小颗粒;密度梯度离心法则是选用特定密度梯度介质离心时,在溶液中形成密度梯度,溶液中的大分子依据密度不同停留在离心管不同位置,形成不同区带。
师:具体实验过程:步骤一,用含氮15物质的培养基培养大肠杆菌,获得含氮15的DNA分子;步骤二,将大肠杆菌转移到含氮14的普通培养液中;步骤三,在不同时期收集大肠杆菌后离心,记录离心后离心管中DNA的位置。第三步,科学家进行演绎推理:假设DNA的复制是半保留复制,亲代大肠杆菌的DNA经离心处理后,离心管中只出现一条重带,将第一代细菌转移到含氮14的培养液中培养离心,离心管中也只出现一条中带,细菌再培养一代,再次对DNA离心,离心管中出现一条轻带和中带。假设DNA的复制是全保留复制,亲代大肠杆菌的DNA经离心处理后,离心管中只出现一条重带,将第一代细菌转移到含氮14的培养液中培养离心,离心管中会出现轻带和重带,细菌再培养一代,再次对DNA离心,离心管中同样出现轻带和重带。假设DNA的复制是分散复制,亲代大肠杆菌的DNA经离心处理后,离心管中只出现一条重带,将第一代细菌转移到含氮14的培养液中培养离心,离心管中会出现混合中带,细菌再培养一代,再次对DNA离心,离心管中会出现混合中带。第四步实验验证,亲代大肠杆菌的DNA经离心处理后,离心管中只出现一条重带,将第一代细菌转移到含氮14的培养液中培养离心后,试管中也只出现一条中带,这就排除了DNA全保留复制方式,细菌再培养一代,再次对DNA离心,试管中出现两条带,轻带和中带,排除DNA的分散复制。第五步实验结论,DNA的复制是以半保留的方式进行的。下面我们总结一下这个实验所用的实验方法——假说演绎法。第一步,发现问题:DNA是如何复制的?第二步,提出假说:半保留复制、全保留复制、分散复制。第三步,演绎推理:探究半保留复制方式下得到子代DNA的可能情况,预测可能的实验结果。第四步,实验验证:证明DNA半保留复制的实验。第五步得出结论:DNA复制是半保留复制。DNA复制的具体过程是怎样的呢?DNA复制的概念是指以亲代DNA为模板合成子代DNA的过程。二、DNA复制的场所,真核细胞主要在细胞核中,线粒体、叶绿体中也有DNA复制;原核细胞主要在拟核中,细胞质中也有DNA复制;病毒在宿主细胞中进行。判断:神经细胞在有丝分裂前的间期进行DNA的复制吗?
生:高度分化的细胞不进行DNA的复制,如神经细胞、哺乳动物成熟的红细胞等。
师:三、发生时期,以真核生物为例,细胞分裂前的间期,随着染色体的复制而完成,包括有丝分裂前的间期和减数分裂前的间期。四、过程:一、解旋,在ATP驱动下,解旋酶将DNA部分双螺旋的两条链解开。问题一,是什么物质将DNA双螺旋打开?
生:解旋酶。
师:问题二,为什么这种物质能将DNA双螺旋打开?
生:因为解旋酶可以断开氢键。
师:二、合成子链,以游离的4种脱氧核苷酸为原料,合成与母链互补的子链,母链和子链之间通过氢键相连,注意氢键形成不需要酶和能量。在DNA聚合酶催化下,单个脱氧核苷酸合成脱氧核苷酸链,DNA聚合酶形成磷酸二酯键。由图可知,DNA的合成有一定方向,从子链的5’端向3’端延伸。问题三,子链的合成以什么为模板?
生:母链或者亲代DNA的两条链。
师:问题四,子链的合成需要什么原料?
生:四种游离的脱氧核苷酸。
师:问题五,子链的合成遵循哪一原则?
生:碱基互补配对原则。
师:问题六,将单个脱氧核苷酸连接起来依靠哪一物质?
生:DNA聚合酶。
师:问题七,DNA的两条链是完全打开后才开始合成子链吗?
生:边解旋边复制。
师:第三,合成子代DNA,每条新链与其对应的模板链盘绕成双螺旋结构。复制的特点是边解旋边复制和半保留复制,遵循碱基互补配对原则。7、DNA能够精确复制的原因有两点:一、DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供精确模板;二、碱基互补配对原则保证复制准确进行。你认为DNA复制会百分百准确吗?如果复制出现错误,可能会产生什么影响?
